Comment calibrer une pipette

Bonnes Pratiques de contrôle des pipettes

Que deviennent les performances de votre pipette entre les étalonnages annuels ?

Suivez les directives des meilleures pratiques ci-dessous pour effectuer un contrôle de routine et apprendre :

• Ce que vous devez préparer
• Comment effectuer les mesures
• Comment analyser les données

Pourquoi un contrôle de routine sur vos pipettes?

Les pipettes doivent être étalonnées chaque année pour maintenir leurs performances. Dans l'intervalle, il est recommandé d'effectuer une vérification rapide pour tester la fonctionnalité de vos pipettes afin d'être sûr des résultats de pipetage lors d'expériences importantes. (Dans certains cas, les calibrations des pipettes doivent être réalisées par un centre agréer pour bénéficier de l'agreement métrologique).

1. Environnement et matériaux

Environnement :

Pour plus de précisions, une table équipée de systèmes antivibration serait un atout (table en marbre, table anti vibration …).

A l'abri des courants d'air, température constante entre 15 °C et 30 °C, écart maximal de ±0,5 °C pendant les mesures.

Equipement :

Une Balance capable de procéder a cette opération comme des Balances de précision, des Balances Semi-Micro ou Micro.

La balance doit être équipé d'une protection contre les courants d'air et d'un piège à évaporation.
Piège alternatif : 4 récipients remplis d'eau dans chaque coin de la cage de pesée.

La précision de votre balance est déterminé par le volume nominal de votre pipette :

Récipient de pesée

Utiliser de préférence un récipient métallique pour minimiser l'accumulation de charges statiques.
Alternative : tube de micro-centrifugation de 1,5 ml.

Liquide de test

Eau distillée

Embouts de pipette

Pour de meilleurs résultats, utilisez les embouts recommandés par le fabricant de la pipette.

2. Avant de commencer

Placez la pipette, les pointes et le liquide d'essai dans la salle d'essai 2 heures avant de commencer les mesures pour atteindre l'équilibre avec les conditions ambiantes.

Notez la date, la température ambiante et la pression atmosphérique. Si aucun baromètre n'est disponible, recherchez sur Internet la pression atmosphérique d'une station météorologique locale.

L'utilisation de techniques de pipetage correctes est cruciale.

3. Test de fuite

Avant d'effectuer toute mesure gravimétrique, testez si la pipette fuit :

1. Pré-humidifiez la ou les pointes en aspirant et en distribuant le volume nominal 3 fois.
2. En utilisant la ou les mêmes pointes, aspirez le volume nominal.
3. Avec la ou les pointes immergées de 2 mm dans le liquide, tenez la pipette verticalement pendant 30 secondes.
4. Si le niveau de liquide ne baisse pas, continuez la validation. Une baisse du niveau de liquide indique une fuite. Contactez le fabricant pour discuter des étapes suivantes.

4. Mesure gravimétrique

Le récipient de pesée ne doit pas être sec. Ajoutez un peu d'eau distillée.

Nombre de mesures

Effectuez au moins 4 mesures, chacune à 100 % et à 10 % du volume nominal. Commencez à 100 %.

Validez le premier canal et un canal intermédiaire sur les pipettes multicanaux.

Procédure de la mesure gravimétrique

1. Tarer la balance avec le récipient de pesée.
2. Chargez une nouvelle pointe de pipette.
3. Effectuez une pré-humidification (voir section 3).
4. Distribuez le liquide dans le récipient de pesée. Veillez à distribuer le long de la paroi intérieure du récipient et terminez en tirant l'extrémité de la pointe le long de la paroi pour éliminer le liquide résiduel.
5. Enregistrez le poids dans un tableau.
6. En utilisant la même pointe, répétez les étapes 4 et 5 au moins 4 fois. Tarez la balance après chaque lecture.
7. Éjectez la pointe et chargez une nouvelle pointe.
8. Répétez les étapes 1 à 7 pour le deuxième volume d'essai.

5. Analyse des données

1.Convertissez les lectures de la balance (mg) en volume (µl) en utilisant le facteur Z (tableau pour déterminer le facteur Z correct) :

Vi = Volume simple en µl

mi = Pesée unique en mg

Z = Facteur Z

2.Calculez le volume moyen par volume d'essai et par canal :

V = Volume moyen

n = Nombre de pesées

3.Calculez la précision (erreur systématique) en % :

es = Erreur systématique en %.

Vs = Volume d'essai sélectionné

4.Calculez la précision (erreur aléatoire) en % :

sr = Ecart-type de répétabilité

CV = Coefficient de variation en %.

Comparez l'exactitude et la précision calculées avec les spécifications du fabricant. Si les valeurs calculées ne sont pas conformes aux spécifications, la pipette doit être étalonnée. Si la pipette a passé le contrôle de routine, elle fonctionne comme prévu.

Résumé : Comment effectuer un contrôle de routine de la pipette ?

1. Effectuez le contrôle de routine dans un environnement sans courant d'air et à une température constante comprise entre 15 °C et 30 °C.
2. Préparez une balance équipée d'une protection contre les courants d'air et d'un piège à évaporation, un récipient de pesée en métal, de l'eau distillée et des pointes.
3. Placez la pipette, les embouts et l'eau distillée dans la salle de test 2 heures avant de commencer les mesures.
4. Notez la date, la température ambiante et la pression atmosphérique
5. Vérifiez que la pipette ne fuit pas.
6. Effectuez au moins 4 mesures gravimétriques, chacune à 100 % et à 10 % du volume nominal.
7. Calculez l'exactitude et la précision et comparez-les aux spécifications du fabricant.